En biologie cellulaire, il est souvent nécessaire de coordonner ou "synchroniser" cellules dans une culture si la majorité des cellules sont au même stade de développement ou de la mitose en même temps. Cette synchronisation permet aux scientifiques d'étudier comment le développement cellulaire est affectée par divers changements dans les conditions de croissance des cellules telles que la température et les différences de lumière, ou l'introduction de produits chimiques ou des agents viraux. La synchronisation requiert le développement des cellules arrêt une fois que la pile atteint un certain stade. De nombreuses méthodes existent pour arrêter le développement; dont l'un est l'introduction d'une substance telle que le nocodazole à la culture cellulaire.
Instructions
1 Séparer le milieu de votre culture cellulaire. Rincer la culture cellulaire à dix millilitres de la solution tampon phosphate.
2 Placez la culture rincés dans une boîte de Pétri avec le milieu complet avec Nocodazole. Incuber le plat avec le milieu de culture et à 37 degrés Celsius pendant 12 heures.
3 Retirer le plat de l'incubateur. Rincez avec le milieu de culture, puis appuyez sur le plat à la légère. Les cellules en mitose rondes vont secouer lâche et peuvent être mis au rebut.
4 Transférer le milieu complet à partir de la boîte de Pétri dans des tubes de polypropylene. Cap les tubes puis centrifuger les à 1000 xg (environ 1600 rpm) pendant 10 minutes.
5 Utiliser la pipette pour éliminer le surnageant (liquide dans les tubes centrifugés). Ajouter 15 ml de solution de tampon phosphate dans chaque tube pour remettre en suspension le solide restant (le culot de cellules). Centrifuger les tubes à 1000 xg pendant 10 minutes.
6 Utiliser la pipette pour éliminer le surnageant dans chaque tube. Ajouter milieu complet (sans Nocodazole). Les cellules sont maintenant prêts à utiliser pour votre expérience.
Conseils et avertissements
- Chaque laboratoire a une recette différente pour un milieu complet et milieu de culture. Suivez les protocoles de votre laboratoire.